ICS 83. 140. 99

G 44

HG

中华人民共和国化工行业标准

HG/T 5644-5645—2019

乳胶枕头和胶乳防氤手套

(2019)

2020-07-01 实施

中华人民共和国工业和借息化部发布

HG/T 5644—2019 乳胶枕头....................................................................................(1 )

HG/T 5645—2019 胶乳防氤手套..............................................................................(27)

HG

中华人民共和国化工行业标准

HG/T 5644—2019

乳胶枕头

LateX PinOW

2019-12-24 发布                            2020-07-0 1 实施

中华人民共和国工业和信息化部发布

ULZ-.          —I—

刖   M

本标准按照GB∕T 1.1—2009给出的规则起草。

本标准由中国石油和化学工业联合会提出。

本标准由全国橡胶与橡胶制品标准化技术委员会胶乳制品分技术委员会（SAC/TC35/SC4） 归口。

本标准起草单位：温州嘉泰乳胶制品有限公司、江苏金世缘乳胶制品股份有限公司、温州嘉博乳 胶制品有限公司、温州佳盛乳胶制品有限公司、温州隆亨乳胶制品有限公司、温州迈德菲家居有限公 司、温州鑫时利乳胶制品有限公司、国珍健康科技（北京）有限公司、海南天然橡胶产业集团股份有 限公司、中胶永生东南亚乳胶制品股份有限公司、西双版纳州质量技术监督综合检测中心、江苏爱德 福乳胶制品有限公司、温州臻荣乳胶制品有限公司、温州赛达乳胶制品有限公司、温州创康家居用品 有限公司、温州市卡美琳乳胶制品有限公司、温州诚晟乳胶制品有限公司、瑞安市赛宝乳胶科技有限 公司、温州奔泰乳胶制品有限公司、温州市明晟家居用品有限公司、温州宝旭乳胶制品有限公司、温 州超泰乳胶制品有限公司、中国热带农业科学院橡胶研究所、上海质量监督检验技术研究院、通标标 准技术服务（上海）有限公司、国家乳胶制品质量监督检验中心、东莞市东安新材料有限公司、佛山 市酷嘉工艺家具有限公司、中国化工株洲橡胶研究设计院有限公司。

本标准主要起草人：郑崇钱、陈乐、邓巧华、赵云飞、曾文海、罗廷飞、曾体鹄、杨烽、林友 金、许建永、洪威、周仕游、贾晓武、马继明、李爱民、张莹、丁爱武、李建斌、柴苹、庄晓亮、金 美申、董仪贤、周跃、徐振坤、彭茂旦、伍洪国、陈余登、彭雪弟、贾道瑞、贾道熙、桂红星、杜英 英、郝晓红、王凤平、郑三阳、唐蜜蜜、黄卫华、樊兴海、邓一志、王金英。

(3)                                                            I

乳胶枕头

1范围

本标准规定了乳胶枕头的要求、试验方法、检验规则以及包装、标志、运输与贮存。

本标准适用于由天然胶乳、合成胶乳或由天然胶乳与合成胶乳两者并用的混合胶乳加入配合剂经 发泡、硫化等工艺制备的乳胶枕芯与枕套组成的乳胶枕头（以下简称“枕头”）.

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件•

GB/T 2828.1计数抽样检验程序 第1部分：按接收质量限（AQL）检索的逐批检验抽样 计划

GB/T 3516-2006橡胶溶剂抽出物的测定

GB/T 4498.1—2013橡胶灰分的测定第1部分：马弗炉法

GB/T 6040—2002红外光谱分析方法通则

GB/T 7764—2017橡胶鉴定红外光谱法

GB/T 10807-2006软质泡沫聚合材料硬度的测定（压陷法）

GB 18401-2010国家纺织产品基本安全技术规范

GB 18587室内装饰装修材料地毯、地毯衬垫及地毯胶粘剂有害物质释放限量

GB/T 24153—2009橡胶及弹性体材料N-亚硝基胺的测定

GB/T 33047.1-2016塑料 聚合物热重法（TG）第1部分：通则

GB/T 33324胶乳制品中重金属含量的测定电感耦合等离子体原子发射光谱法

HG/T 3054胶乳海绵线性尺寸的测定

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

乳胶枕头IateX PiIlOW

由枕套和枕芯组成。枕套是以针织面料为主制作的外套；枕芯是由天然胶乳、合成胶乳或由天然 胶乳与合成胶乳两者并用的混合胶乳加入配合剂经发泡、硫化等工艺制备而成的内芯。

4分类与型号

枕头按用途分为睡枕、抱枕、靠枕、婴幼儿枕。

型号由枕头系列号、产品代号与尺寸表示（见示例）。

（5）                                                                1

ɪ-尺寸

------产品代号

---------系列号

示例：

SZ-LXWXH

系列号——S表示睡枕系列，B表示抱枕系列，K表示靠枕系列，Y表示婴幼儿枕系列；

Z——表示产品代号；

LXWXH—表示产品尺寸：长度X宽度X高度。

5要求

• 5. 1材料

• 5. 1. 1枕套

用于制作枕头的枕套应符合GB 18401-2010中B类要求的规定。用于制作婴幼儿枕头的枕套应 符合GB 18401—2010中A类要求的规定。

• 5. 1.2枕芯

用于制造乳胶枕芯的主要材料为天然胶乳、合成胶乳或天然胶乳与合成胶乳两者并用的混合胶 乳。A类枕芯为纯天然乳胶枕芯，其中天然胶乳成分（不含任何合成胶乳）含量应不低于88%； B 类枕芯为天然胶乳与合成胶乳两者并用；C类枕芯为合成胶乳。

5.2外观

枕头外观应符合表1的规定。

表1外观

5.3尺寸

枕芯的尺寸应符合标称要求。长度公差：按标称尺寸±5%；宽度公差：按标称尺寸±5%；高度 公差：按标称尺寸±10%。

5.4物理性能

枕芯的物理性能应符合表2的规定•

表2物理性能

5.5化学性能

• 5. 5. 1 N-亚硝基胺含量

枕芯中N-亚硝基胺含量不应检出，检出限为O.5mg∕kg°

⑺                               3

• 5. 5.2重金属含量

枕芯中重金属含量应符合表3的规定。

表3重金属含量

• 5. 5.3水抽提蛋白质含量

枕芯中水抽提蛋白质含量应不大于700. 0 μg∕g<,

• 5. 5.4苯乙烯释放量

枕芯中苯乙烯释放量应不大于0. 400 mg∕(m² ∙ h) _β

5. 5.5总有机挥发物(TVOC)释放量

枕芯中总有机挥发物(TVoC)释放量应不大于1.000 mg∕(m² ∙ h)_β

6试验方法

• 6. 1外观

外观检验时，在自然光或日光灯下进行，检验台表面照度不低于600 Ix,且照度均匀，检验人员 眼部距产品75 cm左右，以目视进行检验。

6.2尺寸

将枕芯平摊在检验台上，使其呈自然停放状态，用钢卷尺在整个产品长、宽方向的1/4和3/4处 测量，精确到1 mm。高度采用等高尺测量，精确到1 mm₀

6.3枕套检验

枕套检验按GB 18401—2010的规定进行。

6.4枕芯材料成分的测定

枕芯材料成分的测定按附录A进行.

6.5表观密度

• 6. 5. 1距边部10 mm以上的部位裁取外表面积不低于100 cm²的试样，裁取面应平整，停放10 min.

• 6. 5.2称其质量、测量体积，然后按公式(1)计算出表观密度。

p.=7×¹°⁶           ...........................⑴

式中：

P_a—试样的表观密度的数值，单位为千克每立方米(kg∕m³)₅

4                                                            (8)

m——试样的质量的数值，单位为克（g）;

V——试样的体积的数值，单位为立方毫米（mo?）。

结果修约至O. 1 kg∕m³。

• 6. 5.3每个样品应裁取3个试样试验，样品的表观密度为3个试样表观密度的中位值。

6.6压缩永久变形

压缩永久变形的测定按附录B进行。

6.7压陷硬度

压陷硬度的测定按GB/T 10807-2006中的方法进行，结果取压缩40%的值。

6.8含水率

使用含水率测试仪（或称水分测试仪）插入乳胶枕芯四边和中间共5处进行水分测试。测试前， 测试仪应进行正确的校准和调零。结果取最大值。

6.9 N-亚硝基胺含量的测定

N-亚硝基胺含量的检验按GB/T 24153—2009的规定进行，检出限为0. 5 mg/kg。N-亚硝基胺 的限用清单见GB/T 24153—2009附录A.

• 6. 10重金属含量的测定

枕芯中重金属含量的测定按GB/T 33324进行。

• 6. 11水抽提蛋白质含量的测定

枕芯中水抽提蛋白质含量的测定按附录C进行。

6.12苯乙烯释放量的测定

苯乙烯释放量的测定按GB 18587进行。试样应裁成规则形状的立方体，量取立方体的长、宽、 高进行外表面积的计算，材料/舱负荷比为0.4 π√/H?.

• 6. 13总有机挥发物（TVoC）释放量的测定

总有机挥发物（TVOC）释放量的测定按GB 18587进行。试样应裁成规则形状的立方体，量取 立方体的长、宽、高进行外表面积的计算，材料/舱负荷比为0.4m²∕m³.

7检验规则

• 7. 1检验分类

产品检验分为型式检验和出厂检验。

7.2型式检验

• 7. 2. 1型式检验时机

有下列情况之一时，应进行型式检验：

（9）                                                            5

a） 新产品试制定型或老产品转厂生产时；

b） 正式生产后，当结构、材料、工艺有较大改变而可能影响产品性能时；

C）正常生产情况下，每2年进行一次；

d） 产品停产1年后恢复生产时；

e） 出厂检验结果与上次型式检验有较大差异时；

D 国家质量监督管理部门要求时。

• 7. 2.2检验项目

型式检验项目应包括第5章全部项目.

7.3出厂检验

出厂检验是产品出厂或产品交付时进行的检验，为一般正常生产检验。出厂检验项目为5.2、

5. 3、5. 4«,

7.4抽样方案

• 7. 4. 1组批

出厂检验除另有规定外，每次提交的检验批应由同一配方、采用相同工艺连续生产的产品组成。 可根据实际情况确定，但每批批量应不大于50 OOO个。

7.4.2抽样

抽样检验的单位产品为一个枕头，以不合格品百分数表示产品质量。每批产品按GB/T 2828.1 规定的正常检验一次抽样方案以及表4的规定进行抽样检验。

表4检查水平（IL）和接收质量限（AQL）

7.5合格判定

型式检验结果全部符合第5章规定的要求时，型式检验判为合格。若有一项不合格，则型式检验 判为不合格。

出厂检验结果符合5. 2、5.3、5. 4及表4的规定时，该批产品为合格。若有一项不合格，则对不 合格项目按加严检验一次抽样方案再次进行抽样检验，如合格则该批产品为合格，如仍不合格则该批 产品为不合格。

8包装、标志、运输与贮存

• 8. 1包装

每件产品应有包装，包装大小根据具体产品而定。包装材料应保证产品不散落、不破损、不沾 污、不受潮。用户有特殊要求的，供需双方协商确定。

6                                                           （10）

8.2标志

产品外包装上应包含如下内容：

a） 产品名称、商标；

b） 型号（长度、宽度、高度）、胶乳成分;

C）本标准编号；

d） 检验合格证明、生产批号、生产日期；

e） 制造商名称、地址。

8.3运输与贮存

8- 3.1产品在运输和贮存过程中，应有遮盖物，不应重压、沾污、强烈高温、阳光直射、雨雪浸淋， 禁止与酸、碱、油类、有机溶剂、热源及其他对橡胶性能有损害的物质接触。

8.3.2产品应存放在干燥、通风的库房内，不应与有毒有害的物质一起存放。

• 8. 3.3乳胶枕芯自生产之日起，在8.3.1、8. 3. 2规定的贮存条件下，常态下贮存期为24个月，压 缩包装下贮存期为3个月。

(11)

附录A

（规范性附录）

乳胶枕芯成分的测定

• A. 1概述

利用傅里叶变换红外光谱仪、热重分析仪、能量色散X射线荧光光谱仪、裂解气相色谱质谱联 用仪、电感耦合等离子体发射光谱仪、马弗炉测定乳胶枕芯中的成分。

• A. 2试剂

• A. 2. 1氯仿：分析纯。

A. 2.2丙酮：分析纯。

A.3仪器设备

• A. 3. 1傅里叶变换红外光谱仪（FTlR）。

• A. 3.2热重分析仪（TGA）。

• A. 3.3能量色散X射线荧光光谱仪（EDX）。

• A. 3.4裂解气相色谱质谱联用仪（PyGCMS）。

• A. 3.5电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）.

A. 3.6 15OmL全玻璃抽提装置：包含回收瓶、索氏提取器、冷凝管。

• A. 3.7马弗炉。

• A. 4测试方法

• A. 4. 1 FTIR 测试

按照GB/T 7764—2017, GB/T 6040—2002,采用傅里叶变换红外光谱仪，在4 000 CmT〜400 _Cm-I 波数范围采集乳胶枕芯、助剂、无机物的红外光谱图，通过红外光谱图谱图解析乳胶枕芯的成分信息。

A. 4. 2 PyGCMS 测试

乳胶枕芯选用裂解温度550 "C,助剂选用裂解温度300 X2.分流比100,色谱柱DB-5,柱温 40 "C ,保温2 min,升温速率13P∕min,最终温度保持8 min.

A. 4.3索氏提取

按照GB/T 3516-2006,选择合适的溶剂，抽提乳胶枕芯的助剂，再烘干样品，计算提取物的 含量，并将提取物用于FTIR, PyGCMS分析成分。

8                                                           （12）

A. 4.4 TGA 测试

按照GB/T 33047.1—2016,样品称重4mg~10mg,升温速率为10^cC∕min,氮气气氛，升温至 600 IC ,在600 P时切换为空气，以升温速率为IOP∕min升温至700 P (若有石墨存在升温至 850 D.

A. 4. 5 EDX 测试

EDX-7000测试元素范围¹¹Na-⁹²U,气氛为抽真空，记录样品的元素信息。

A. 4.6灰分含量的测试

按照GB/T 4498.1—2013进行测试，样品称重2 g〜10 g, 600 "C马弗炉焼烧时间应不超过3 h, 冷却称重至恒重，计算所得灰分含量。

A.5结果与计算

A. 5. 1纯天然胶乳乳胶枕芯成分结果与计算

A. 5. 1. 1 FTIR 结果

通过红外吸收峰 840 CIn^-1, 890 Cm-1、1 037 Cm一'、1 126 Cm^-I , 1 375 Cm-\ 1 444 Cm^-I 等判 定样品的成分为聚异戊二烯。FTIR结果见图A. 1.

波数/CmT

图A. 1乳胶枕芯的FTlR图

A. 5. 1.2 PyGCMS 结果

通过保留时间为1.125 min的异戊二烯单体主峰碎片、保留时间为7.717 min的异戊二烯二聚体 主峰碎片判定样品的成分为聚异戊二烯橡胶。PyGCMS结果见图A. 2。

(13)                                                           9

O.5O

5 O 5 Q 5 .75 20.7

新。LL O

12.5      15.0      17.5

保留时间∕min

22.5     25.0     27.5

图A.2乳胶枕芯的PyGCMS图

A. 5.1.3助剂结果

经过丙酮或氯仿抽提8 h,称重计算得到提取物含量为将溶剂通过氮吹仪吹干，测提取物的 FTIR, PyGCMS,从FTlR、PyGCMS的裂解碎片判断提取物成分。助剂含量为提取物减去 天然胶乳固有物质后的含量。结果见图A.3、图A.4。

4 000                3 000                2 000                1 500                1 000                500

波数/ɑɪɪT

图A. 3提取物的FTIR图

(14)

0.50

0.25

5 心 5 l∙2l.(×0.7

胃Oll

5.0         7.5         10.0        12.5        15.0        17.5        20.0        22.5

保留时间∕min

图A. 4提取物的PyGCMS图

A. 5. 1.4 TGA 结果

第一步失重主要为低分子量的助剂失重，第二步失重为天然胶乳的分解失重，剩余无机物含量为 b%_o TGA结果见图A. 5_β

1201-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------16

10080604020 汶/SW

PM)、M-煩岫* 4 2 0

200                    400                    600

温S/C

图A. 5乳胶枕芯的TGA曲线

A. 5. 1.5原样的EDX结果

根据EDX数据确定是否含Zn、S、Si等元素。进一步确认硫化促进剂是否为二乙基硫代氨基甲 酸锌、含硫硫化剂。根据已知硫含量的EDX标准曲线以及ICP测试结果推算硫含量约为c⅛_o EDX 结果见图A. 6_o

测琶条件

芫秦..... kV UA 'Filter

AHJ             50 28-AUto ——

Na-SC               15 193-AUtO ----

A. 5. 1. 6灰分的结果

经过FTIR分析，灰分结果m＜以质量分数表示。

A. 5. 1.7天然胶乳含量计算

天然胶乳含量计算按公式(A.1)进行：

天然胶乳含量= 100⅜-m₂~^Wi₃-Tn₄          ............ (A. 1)

式中：

m₂—提取物减去天然胶乳固有物质后的助剂含量；

m₃——含硫硫化剂含量；

--灰分含量。

A. 5.2并用天然胶乳乳胶枕芯成分结果与计算

A. 5. 2. 1 FTlR 结果

通过红外ArR吸收峰840 Cm^-I判定为聚异戊二烯成分，699 cm^¹, 752 Cnl^-1, 913 Cm-¹, 969 Cm^-I 判定为丁苯胶乳成分。通过液氮脆化，KBr压片的红外光谱图3 300 CmT〜3 620 cm-，_I θ_{19 Cm}-I 797 cm-'、661 Cm^-ɪ判定为冬氧化铝成分。FTlR结果见图A.7、图A. 8。

4000              3 000              2 000               1 500               IooO               500

波数/CmT

图A. 8乳胶枕芯的FTlR-KBr图

A. 5. 2. 2 PyGCMS 结果

通过保留时间为1.125 min的异戊二烯单体主峰碎片、保留时间为7. 717 min的异戊二烯二聚体 主峰碎片判定样品的成分为聚异戊二烯橡胶。通过保留时间为1.017 min的丁二烯碎片、保留时间为 5. 742 min的苯乙烯碎片判断样品中除了聚异戊二烯橡胶外还含有丁苯胶乳。PyGCMS结果见 图 A. 9.

O.5O

.25

Oo75

LO.

钢SOI1

5.0      7.5      10.0     12.5     15.0     175     20.0     22.5     25.0     27.5

保留时冋∕min

图A.9乳胶枕芯的PyGCMS图

A. 5. 2. 3助剂结果

经过丙酮或氯仿抽提8 h,称重计算得到提取物含量为”1。将溶剂通过氮吹仪吹干，测提取物的 FTIR, PyGCMS,从FTlR （图A. 10）, PyGCMS （图A. 11）的裂解碎片判断提取物成分_I）助剂含 量n₂为提取物n₁减去天然胶乳固有物质后的含量。

8070605040302010

4 000               3 000                2 000                1 500                1 000                500

波数/cm-i

图A.10提取物的FTlR图

0.50

0.25

0 5 0 5 0 5 .01.75 2.0.7 ZLLlLO

蝦囲。LL

5.0         7.5         10.0        12.5        15.0        17.5        20.0        22.5

保留时间∕min

图A. 11提取物的PyGCMS图

A. 5. 2. 4 TGA 结果

第一步失重为低分子量的助剂失重，第二步失重为氢氧化铝分解为氧化铝和水失重，第三步失重 为天然胶乳和丁苯胶乳的分解失重，剩余物为无机物，TGA结果见图A.12。提取剩余物的TGA见 图A. 13,第一步失重为氢氧化铝分解为氧化铝和水失重（水的质量分数〃3），第二步失重为天然胶 乳的部分失重（含量〃4）。

1201---------------------------------------------------------------------------------------------------------------16

IOO

80

60

40

20

o

(□√%<w-≡帼* 4 2

200

600

400 温度∕*C

.O.O.O.O.O.O.O.O.O 7.&5.43.2.L0.9 555555554

图A. 12乳胶枕芯的TGA曲线

图A. 13提取剩余物的TGA曲线

A. 5. 2. 5原样的EDX结果

根据EDX数据（图A. 14）确定样品是否含Zn、S、Al元素。进一步确认硫化促进剂是否为二 乙基二硫代氨基甲酸锌、含硫硫化剂、氢氧化铝。根据已知硫含量的EDX标准曲线以及ICP测试结 果推算硫含量为D%。

图A. 14 乳胶枕芯的EDX结果

A. 5. 2. 6灰分的结果

灰分结果％以质量分数表示。经过FTIR分析，主要是氧化锌、乳胶高温分解产物硅酸盐、氧 化铝。

A. 5. 2. 7天然胶乳含量计算

天然胶乳含量计算、氢氧化铝含量计算、丁苯胶乳含量计算按公式（A.2）〜公式（A.4）进行:

天然胶乳含量= -τ∙(100⅜-n₁) + (n₁ — n₂)             ......... (A. 2)

156n₃ 氢氧化铝含量= F^l(IoO%-*ι)           ......... (A.3)

54               ¹

丁苯胶乳含量= 100% —天然胶乳含量一n₂-n₅-(n₃+«6)           ......... (A. 4)

式中：

n_t——抽提后样品的天然胶乳部分失重含量；

A―10个纯天然胶乳标准样品的TGA第一步失重平均系数；

nɪ--提取物含量；

H₂——提取物«1减去天然胶乳固有物质后的助剂含量；

n₃——抽提后样品的氢氧化铝分解脱水含量；

n₅--含硫硫化剂含量；

n₆--灰分含量。

A. 5. 2. 8标样红外光谱图

除了上述的TGA方法外，还应严格按照天然胶乳和丁苯橡胶的混合红外标样图对照定量。图 A. 15为标样的红外光谱图。

6040200-20-406040200-20

%/>素帯-

3 000                  2 000                  1 500                  1OOO                  500

波数/CmT

图A. 15标样的红外光谱图

(21)

附录B

（规范性附录）

压缩永久变形的测定

• B. 1 原理

在规定时间、规定温度使试样保持恒定的变形，记下卸压后试样厚度的变化。

• B.2 试样制备

• B. 2. 1试样的长、宽均为（50土 1） mm,各处厚度差不得超过士lmm。

• B. 2.2实验前，试样应在下列任一种环境中状态调节16 h以上，然后立即进行试验，试验也应在下 列条件下进行：

a） 温度为23P±2P ,相对湿度为50%±5%;

b） 温度为27P±2*C,相对湿度为65%±5%。

• B.3试验步骤

• B. 3. 1按HG/T 3054所述的方法精确测量试样的初始厚度（TO）。

• B. 3.2按B■ 2. 2的要求调节试样。

• B. 3.3将试样放在压缩器的两块平板之间，压缩至初始厚度（TO）的50%,然后置于（70土I）P 的恒温箱中（22±0.2）L

• B. 3.4从恒温箱中取出压缩器，将试样在Imin内从夹板中取出，放置在低导热物体表面上，试样 在与状态调节相同的环境下恢复1. 5 h_o

• B. 3.5在试样原测量位置测量试样的厚度（T1）。

• B. 4结果表TF

乳胶枕芯的压缩永久变形按公式（B.1）计算：

T_O-T_I

压缩永久变形=  —XIO0%           ......... （B. 1）

¹ O

式中：

T_O——试样的初始厚度的数值，单位为毫米（mm）；

T_l—试样压缩后经过恢复的厚度的数值，单位为毫米（mm）。

至少要用2块试样进行试验，取其结果的算术平均值作为试样的压缩永久变形。

附录C

（规范性附录） 水抽提蛋白质含量的测定

• C. 1原理

用缓冲溶液抽提水溶性蛋白质，然后通过沉淀、浓缩将其从有可能干扰测定的其他水溶性物质中 分离出来，再溶解沉淀的蛋白质，以标准蛋白质作参照，用L。Wry方法进行比色，定量测定水抽提 蛋白质含量。

• C.2仪器设备

试验所用到的器皿（容量杯、试管）均为聚丙烯或聚乙烯制造。

• C. 2. 1 离心机

离心机转速至少达到6 OOO r/min （6 000g）＜,

注：当离心时间延长时，温度可能会上升，最好用冷冻离心机.

• C. 2.2离心管

容量为200 mL、50 mL、25 mL蛋白质吸附量少的聚丙烯或聚乙烯（如果适用）离心管。

• C.2.3移液管

适用于试验的移液管 25 mL、20 mL、10 mL∙, 5 mL、2 mL、1 mL。

• C. 2. 4试管振动器

振动频率为3Hz~6Hz°

• C. 2.5紫外分光光度计

比色皿：一次性使用聚苯乙烯透明比色皿或者石英材质比色皿（要求十分干净）。

• C. 2. 6天平

精确到0. 000 1 g_o

• C.3试剂

实验过程中，使用的试剂均为分析纯，配制试剂的水均为蒸储水。

• C. 3. 1抽提液

在整个抽提过程中PH值能保持在7. 4±0.4范围内的一种缓冲溶液。

注L适用的缓冲溶液包括0. 01 mol∕L磷酸盐緩冲溶液（PBS）和0.1 mol/L N-=.（羟甲基）甲基-2-氨基乙磺酸 钠盐缓冲溶液（TES）。磷酸盐缓冲溶液的制备是根据产品说明将磷酸盐溶解于蒸馋水中，如果缓冲溶液的

（23）                                                          19 PH值达不到7.4±0.4,有必要使用浓度高一点的磷酸盐溶液.TES缓冲溶液的制备是将24 g TES溶于 50OmL水中，然后用水稀释至1L.

注2： PBS和TES可以在市场采购.

• C. 3. 2 LOWry法蛋白质试剂

C. 3. 2. 1试剂A：碱性柠檬酸铜溶液。

将10份试剂C和0.2份试剂D混匀，在检验当天配制。

C. 3. 2. 2 试剂B：用28 mL水加入72 mL 2 mol/L福林试剂得到的稀溶液。

注：2mol∕L福林试剂可在市场上购买.

C. 3. 2. 3试剂C： 6g碳酸钠溶解在IOomL水中的溶液。

C. 3. 2. 4试剂D： 1.5 g硫酸铜和3 g柠檬酸钠溶解在IOomL水中的溶液。

C. 3. 2. 5 氢氧化钠溶液：C（NaOH）=O.2 mol/L.

C. 3. 2. 6脱氧胆酸钠（DOe）溶液：用水溶解0.15 g脱氧胆酸钠，稀释至IoOmL的溶液。

冷藏贮存，有效期为4周。

C. 3. 2. 7三氯乙酸（TCA）溶液：用水溶解72 g三氯乙酸，稀释至IOOmL并混合均匀的溶液。 冷藏贮存，有效期为4周。

C. 3. 2. 8磷钧酸（PTA）溶液：用水溶解72 g磷瞥酸至IOomL并混合均匀的溶液。

冷藏贮存，有效期为4周。

C. 3.3卵清蛋白贮备液

卵清蛋白是用硫酸俊分馋并在pH = 4.5时重复结晶所得。也可从市场上采购。

将IOOmg卵清蛋白溶解于IOOmL抽提液（C. 3. 1）中制备成浓度为1 ɪng/mL的贮备液。用分 光光度计，以光程为Iem的比色皿，在280 nm处测定蛋白质的吸光度。以抽提液（C. 3.1）作为空 白样，然后将吸光度除以消光系数0. 64,得到卵清蛋白贮备液的精确浓度。在溶液不高于7 P条件 下可稳定贮存48 h,或在一IOP条件下可冷冻贮存2个月，融化时要求加热到45 ⁰C并保温15 min.

注：冷藏时间为累计时间。为避免反复冷冻和融化，建议将蛋白质贮备液分几份贮存，每份足够制备一条校准曲 线或在验证试验步骤中足够使用。

C.4试验步骤

在（25±5）P条件下，将称好的枕芯样品放在聚乙烯杯中，用抽提液抽提（120±5） min.抽提 时应进行3个平行试验，对每份抽提液应单独进行测定。

C. 4. 1抽提

C. 4. 1. 1称量样品质量（τn）,至少精确至O. OOl g_o

C. 4. 1. 2将乳胶枕芯样品剪碎，放入聚乙烯杯中。

C. 4. 1.3准确加入适量体积的抽提液（C.3.1）,每克乳胶枕芯抽提液的用量在10 mL~15 mL之 间，使其完全浸泡。

20                                                      <24）

C. 4. 1.4在（25±5）*C条件下，将乳胶枕芯样品抽提（120±5） min.开始时搅动试片15 s,然后不 超过30 min搅动一次，最好连续缓慢搅动.

C. 4. 1.5 将抽提液移入离心管中，在不低于2 000 r/min （2 00Og）的条件下离心15 min,将固体物 离心分离。分离出的抽提液最好立即试验，但也可以在不高于7 P条件下贮存48 h,或者在低于 -10笆条件下可冷冻贮存15 d₀

C.4.2蛋白质标准溶液的制备

蛋白质标准溶液的制备是用抽提液（C.3.1）将蛋白质贮备液（C.3.3）稀释，制备下列蛋白质 标准溶液：O. 25mL、O. 50mL、1. OO mL, 2. OO mL、5. OO mL, 10. OO mL.同时用抽提液（C. 3.1） 作空白。溶液可冷藏2d。

C. 4.3蛋白质的沉淀与浓缩

C. 4. 3. 1在（25±5） P条件下逐一进行测试。

C. 4. 3. 2分别移取4 mL抽提液（C. 3.1）（作为一个空白样）、蛋白质标准溶液（C. 4. 2）和3份乳 胶枕芯抽提液，置于50 mL离心管（C.2.2）中，各加入2 mL DOC溶液（C.3.2. 6）,混匀并静置 10 min,然后各加入2mLTCA溶液（C. 3. 2. 7）并混匀，再加入2 mL PTA溶液（C. 3. 2. 8）混匀， 静置30 min₀

注：溶液量须满足比色分析的需要.如样本量增大，则特别注意清楚标识每个离心管。

C. 4. 3. 3将离心管在不低于6 OOO r/min （6 OOOg）的条件下离心30 min,确保蛋白质充分沉淀，如 有必要可延长离心时间。倾去上层清液，将每个离心管倒置在滤纸上，让水流干。在每个离心管中加 入0.8 mL浓度为0. 2 mol∕L的N_aOH溶液（C. 3. 2. 5）（包括空白样），用来再溶解蛋白质，必要时 使用旋涡混合器，使蛋白质沉淀溶解完全。

确保蛋白质完全溶解至澄清溶液。假如还有蛋白质沉淀，可继续加入定量的3. 2 mL NaOH溶液 （即总量为4. OmL）。在每一个溶液中加入N_aoH溶液的量应相同。加入推荐量0.8 mL的N_aOH溶 液时，浓缩因子F为5。

如果每个样加入的NaOH的量不同，F也不相同：

F =沉淀前抽提液体积/溶解蛋白质所用NaOH溶液体积

溶解后的蛋白质溶液最好当天测定。如不能立即进行测定，溶液可在不超过7P的条件下贮存且 不超过24 h。如果加入4. O mL NaOH溶液后沉淀还没完全溶解，可在6 OOO r/min （6 OOOg）的条件 下离心15 min,直至出现澄清蛋白质溶液为止。

C.5比色检验

C. 5. 1按使用说明打开分光光度计并调零。

C. 5.2 分别在0.8mL再溶解蛋白质溶液及空白样（C. 4. 3. 2）中加入0. 3 InL试剂A （C. 3. 2.1）, 混匀。再加入0.1 mL试剂B （C. 3. 2. 2）,混匀。样品溶液在测定吸光度前至少静置15 min,但不得 超过Ih.

C. 5.3分光光度计测定。

加入试剂B后Ih内，移取C. 5. 2准备好的溶液到比色皿中，在波长750 nm处（最好）或在规 定波长600 nm~750 nm范围内对照空白样测定其吸光度。为统一结果，时间范围、仪器和选择波长 （25）                                                      21

必须保持一致。测定蛋白质含量的单位为"g/g （见C. 6.3）.每个校准曲线溶液测量2次，试液测量 2次。

C.6结果计算

C.6. 1校准曲线

以蛋白质校准溶液（C.3.3）的浓度对应经过沉淀和再溶解（C.4.3.3）后吸光度绘制校准曲线。

C. 6. 2浓度计算

3个抽提样中的每个样品浓度C值根据其吸光度直接在校准曲线上读取，单位为_μg∕mL,结果取 中值.

C. 6.3可抽提蛋白质含量的计算

每克乳胶枕芯中可抽提蛋白质含量为E,数值以μg∕g表示，按公式（C.1）计算：

式中：

P—抽提液的体积的数值，单位为毫升（mL）；

C——再溶解蛋白质溶液蛋白质的浓度的数值，单位为微克每毫升（μg∕mL）₅ F——浓缩因子；

m——被抽提乳胶枕芯样品的质量的数值，单位为克（g）.

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